结直肠癌是胃肠道常见恶性肿瘤之一，发病率及死亡率仅次于胃癌和原发性肝癌，其早期症状不明显，随着肿瘤增大表现出腹泻和便秘交替、便血、局部腹痛等症状，疾病晚期则出现明显体重减轻、贫血等全身症状［1］。器官转移作为结直肠癌患者的主要死因，有15%～25%的结直肠癌患者确诊时已合并有肝转移［2］，上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）作为癌细胞侵袭及转移的第一步也是最重要的一步［3］，在结肠癌的发生进展过程中发挥着重要的作用。EMT的发生是由多种信号途径及细胞因子共同调控的结果，转化生长因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β）是几乎所有上皮细胞发生EMT必不可少的诱导因子，能够与多种细胞内信号通路交互联系从而参与肿瘤的发生进展中［4］。目前寻找天然抗肿瘤化合物是学者们的研究热点之一，桂皮醛（Cinnamaldehyde）是从中药肉桂中提取的一类烯醛类有机化合物，国内外大量药理研究结果表明，其具有抗炎、解热镇痛、抗肿瘤、抗菌、降糖、抗肥胖等多种药理活性［5-6］，但以往的有关于桂皮醛抗肿瘤的研究主要集中在抑制细胞增殖及凋亡等方面，而对肿瘤细胞侵袭、转移等影响的相关研究较少。本次研究通过使用不同浓度的桂皮醛处理人结直肠癌SW480细胞系发现其能够有效抑制SW480细胞的侵袭、转移及EMT，同时对其可能的调控机制进行了研究。

1 材料与方法

1.1 主要材料

人结肠癌SW480细胞（购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库，本实验室自行传代培养）；桂皮醛（购自中国食品药品检定研究院）；TGF-β1冻干粉（美国Peprotech公司）；10%胎牛血清、青霉素（美国Sigma-Aldrich公司提供）；兔抗Bcl-2、Bax、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、TGF-β、Smad3、Snail、β-actin多克隆抗体（美国Abcam公司），辣根酶标记羊抗兔IgG（北京索莱宝生物科技公司），Matrigel胶（美国BD公司），PVDF膜（美国Millipore公司）；24孔Transwell小室（Corning costar公司），MTT细胞增殖检测试剂盒、Hoechst染色试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒（碧云天生物技术研究所）。

1.2 细胞培养

将人结肠癌SW480细胞培养于含10%胎牛血清、100 U／mL青霉素的完全RPMI 1640培养液培养，并在37℃的5%CO2的加湿培养箱中培养至对数期，0.25%胰蛋白酶消化液处理制成细胞悬液，每2～3 d换液传代。

1.3 指标检测方法

1.3.1 MTT法检测SW480细胞的增殖抑制率

将培养好的SW480细胞分为4组，分别加入0 mg／L、20 mg／L、40 mg／L、80 mg／L桂皮醛溶液后，调整细胞数目为2×107个／L，接种至96孔板上，每组均设置6个复孔，在接种后12、24、48 h吸去上清，向每孔滴加含MTT 20μL的RPMI-1640培养液培养液后，继续培养4 h后，弃上清，每孔加入二甲亚砜（DMSO）溶液150μL，轻轻震荡混匀后，用全自动酶标仪检测各孔在490 nm波长处的OD值，计算各组细胞的增殖抑制率＝（1-OD药物组／OD空白组）。重复试验3次。

1.3.2 Hoechest 法检测SW480细胞的凋亡率

将培养好的SW480细胞分为4组，分别加入0 mg／L、20 mg／L、40 mg／L、80 mg／L桂皮醛溶液后，调整细胞数目为1×106个／L接种至24孔板中，继续培养48 h后，吸去培养液，用0.5 mL的固定液固定10 min，并用PBS缓冲液冲洗2次后吸尽液体，加入0.5 mL Hoechest 染色液染色5 min，吸去液体，继续PBS缓冲液清洗2次，在荧光显微镜下激发波长350 nm，发射波长460 nm观察细胞。出现细胞体积缩小、核固缩、凋亡小体形成则判断为凋亡细胞。随机选取5个清晰视野统计凋亡细胞数目及总细胞数目，凋亡指数＝视野内凋亡细胞数／细胞内视野总数×100%。

1.3.3 Transwell小室体外侵袭实验检测SW480细胞侵袭率

收集入0 mg／L、20 mg／L、40 mg／L、80 mg／L桂皮醛溶液处理后的SW480细胞，利用PBS冲洗细胞后，放置到无胎牛血清的RPMI 1640中继续培养24 h。调整细胞数至1×105个／mL的单细胞悬液。将200μL细胞悬液放置在铺好Matrigel胶的Transwell小室内，每组设置3个复孔。在小室放置到加入500μL的100 mL／L胎牛血清培养液的24孔板中继续培养24 h后取出小室，用PBS淋洗，并利用棉签轻柔的擦去上层未穿膜的细胞和基质胶，用冰甲醛对滤膜进行固定后，用结晶紫染色30 min。将滤膜剥离后正面朝下固定在载玻片上，在光学显微镜下随机选择5个高倍镜（×400）下视野的细胞数目。计数每个视野的平均穿膜细胞数。重复试验3次。

1.3.4 划痕实验检测SW480细胞迁移率

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